شناسایی قارچ‌های میکوریز آربوسکولار همزیست با ریشه ذرت در شهرستان حاجی آباد استان هرمزگان

پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 1036-25IPPC (R1)
نویسندگان
1Researcher
2Associate Professor
چکیده
قارچ‌های میکوریز آربوسکولار از میکروارگانیسم‌هایی هستند که در ریزوسفر گیاهان زندگی می‌کنند. آن‌ها برای به دست آوردن کربن مورد نیازشان به گیاهان میزبان خود وابسته بوده و به دلیل دسترسی به این منبع کربن به خوبی می‌توانند در انتقال نیتروژن، فسفات، پتاسیم و سایر مواد غذایی به گیاه میزبان در رقابت با ساپروفیت‌ها موفق شوند. به طور سنتی گونه‌های میکوریز با ویژگی‌های ریخت‌شناسی اسپور‌ها و اسپورکارپ‌ها، اتصالات اسپور و هیف‌های متصل به اسپور شناسایی می‌شوند، اما امروزه روش‌های مولکولی برای شناسایی این میکروارگانیسم‌ها بطور گسترده مورد استفاده قرار می‌گیرند. به منظور جداسازی و شناسایی قارچ‌های میکوریز آربوسکولار همزیست ریشه ذرت، نمونه‌‌هایی از ریشه و خاک ناحیه ریزوسفر و از عمق 30-5 سانتیمتری مزارع ذرت شهرستان حاجی‌آباد استان هرمزگان طی فصل‌های بهار و تابستان صورت گرفت.جداسازی اسپور خاک‌های نمونه‌برداری شده، با روش سری الک مرطوب انجام شد. اسپورها براساس ویژگی‌های ریخت شناسی مانند اندازه، رنگ، شکل، تزئینات سطح و هیف اتصال گروه‌بندی شدند و از این گروه‌ها برای شناسایی ریخت شناسی و مولکولی استفاده شد. همچنین پس از رنگ آمیزی ریشه‌های نمونه برداری شده، درصد کلونیزاسیون آن‌ها تعیین شد. استخراج DNA از تک اسپورهای متعلق به هر گروه اسپوری، با بافر 5X GoTaq PCR انجام شد. تکثیر DNA طی دو مرحله و با روش PCR آشیانه‌ای با استفاده از جفت آغازگرهای SSUmaf و LSUmar درمرحله اول و از آغازگرهای SSUmCfوLSUmBr در مرحله دوم انجام شد. محصول حاصل ازPCR روی ژل آگارز بررسی و نقوش الکتروفورزی حاصل مشاهده و ثبت شد. قطعات تکثیرشده از نمونه‌های قارچی به شرکت ژن فن آوران ارسال و به روش سنگر و دوطرفه توالی یابی شدند. توالی‌های قارچی میکوریزی به‌دست‌آمده با سایر توالی‌های شاخه گلومرومایکوتا بدست آمده از بانک ژن هم‌تراز شدند. توالی‌های جدید در پایگاه داده NCBI ثبت شدند. بر اساس داده‌های به دست آمده از بررسی‌های ریخت شناسی و مولکولی، چهار گونه Septoglomus constrictum ، S. jasnowska، Rhizophagus irregularis، Pacispora scintillans از ریزوسفر ذرت شناسایی شد.
کلیدواژه ها
 
Title
Identification of arbuscular mycorrhizal fungi symbiotic with corn roots in Hajiabad county, Hormozgan province
Authors
Lale Ilkhan, Ebrahim Sedaghati, Hossien Alaee
Abstract
Arbuscular mycorrhizal fungi are exclusive members of a large population of microorganisms that live in the rhizosphere of plants. They depend on their host plants for the carbon they need, and due to access to this carbon source, they can successfully transfer nitrogen, phosphate, potassium, and other nutrients to the host plant competing with saprophytes. Traditionally, mycorrhizal species are identified by the morphological characteristics of spores and sporocarps, spore connections, and hyphae attached to spores. However, more complex molecular methods are also currently in use. Soil and root sampling was carried out in several stages in the spring and summer from the rhizosphere area at a depth of 5-30 centimeters of corn fields in Hajiabad, Hormozgan Province. The wet sieve method was used to separate spores from sampled soils. Spores were grouped based on morphological characteristics such as size, color, shape, surface decorations, and hyphal attachment, and these groups were used for morphological and molecular identification. Also, the sampled roots were stained and their colonization percentage was determined. DNA extraction from single spores belonging to each spore group was performed with 5X GoTaq PCR buffer, and then the PCR nesting method was used for DNA amplification with the primer pairs SSUmaf and LSUmar in the first stage and SSUmCf and LSUmBr in the second stage. The product of the PCR was examined on agarose gel and the resulting electrophoresis patterns were observed and recorded. Amplified pieces from fungal samples were sent to Gen Fanavaran Company and sequenced by the Sanger and bidirectional method. The obtained mycorrhizal fungal sequences were aligned with other Glomeromycota sequences from the GenBank and the new sequences were registered in the NCBI database. Based on the data obtained, four species Septoglomus constrictum, S. jasnowska, Rhizophagus irregularis, Pacispora scintillanswere identified from the corn rhizosphere.
Keywords
Molecular identification, Arbuscular Mycorrhizal Fungi, Septoglomus, Rhizophagus, Pacispora