اولین گزارش قارچ اندوفیت Syncephalastrum racemosumاز جلبک کاهو دریایی (Ulva sp.) در دنیا

پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 1040-25IPPC (R1)
نویسندگان
1ندارم
2Pazhuhesh Blvd
چکیده
این مطالعه با هدف جداسازی و شناسایی قارچ‌های اندوفیت جلبک کاهو دریایی (Ulva sp) صورت گرفت. جنس Syncephalastrum متعلق به راسته Mucorales است. براساس سامانهIndex Fungorum (www.indexfungorum.org) جنس Syncephalastrum از دو گونه S. racemosum و S. monosporum تشکیل شده است. در این تحقیق نمونه‌های کاهو دریایی (Ulva sp.) در فصل پاییز سال 1401 از بندرعباس- ساحل شیلات (ایران) جمع‌آوری و به آزمایشگاه منتقل گردیدند. نمونه‌ها به روش ضد‌عفونی چند‌مرحله‌ای شامل اتانول 70 درصد (1 دقیقه)، یک بار شستشو با آب مقطر استریل، مجددا اتانول 70 درصد (15 ثانیه) و سه مرتبه شستشو با آب مقطر استریل ضدعفونی سطحی شدند. برای تایید درستی ضدعفونی سطحی از آخرین آب شستشوی نمونه‌ها روی محیط کشت PDA کشت شد. نمونه‌ها پس از خشک شدن به قطعات کوچک تقسیم و در محیط کشت PDA حاوی عصاره کاهو دریایی (200 میلی‌لیتر در لیتر) کشت و به مدت 3 هفته در انکوباتور با دمای 25 درجه سلسیوس نگه‌داری شدند. جدایه‌‌های رشد یافته به روش نوک ریسه خالص‌سازی شدند. در این تحقیق تعداد 3 ایزوله جداسازی شد. عدم رشد قارچ‌‌ها در تشتک‌‌های پتری کشت شده با آب حاصل از شستشوی سوم کارایی ضد‌عفونی سطحی را نشان داد. شناسایی جدایه‌-ها بر اساس ویژگی-‌های ریخت‌شناسی و توالی‌ ناحیه ITS انجام‌شد. براساس خصوصیات مورفولوژیکی این ایزوله‌ها تولید میسلیوم‌های هوایی فراوان روی محیط کشت PDA نمودند که بسیار سریع الرشد بودند. رنگ کلنی ابتدا سفید و در اثر اسپورزایی به خاکستری تیره و سپس سیاه تبدیل می‌شد. اسپورانژیوفورهایی به صورت راست، ساده تا منشعب (3-4 میکومتر قطر) ایجاد می‌کردند که در انتهای به وزیکول‌هایی کروی تا بیضوی (11-16 میکرومتر قطر) قهوه‌ای رنگ منتهی و مستقیم روی سطح آنها مرواسپورانژیوم‌هایی به صورت شعاعی شامل ردیف‌های استوانه‌ای حاوی 1-8 اسپورانژیوسپور تشکیل می‌شد. اسپورانژیوسپور‌ها با دیواره صاف به صورت تخم مرغی، کروی، بیضوی، استوانه‌ای و اشکال متنوع دیگری (2-6 میکرومتر قطر) بودند. با استفاده از پرایمر‌های ITS1 و ITS4 قطعه‌ای 621 جفت باز برای جدایه مورد نظر تکثیر شد. توالی جدایه مورد نظر 100 درصد با گونه‌ی S. racemosum شباهت نوکلئوتیدی داشت. بررسی خصوصیات ریخت شناسی و نتایج حاصل از توالی سنجی ناحیه فاصله ترانویسی شده داخلی (ITS) نشان داد ایزوله‌های جداسازی شده متعلق به قارچ S. racemosum می‌باشد. گونه قارچی شناسایی شده در این تحقیق برای نخستین بار در ایران و دنیا از روی جلبک Ulva sp. گزارش می‌شود. ارتباط تکاملی جدایه مورد مطالعه با جدایه-های این گونه و گونه‌های دیگر جنس Syncephalastrum موجود در بانک ژن و مقالات معتبر در حال تکمیل شدن است و در گزارشات آینده منتشر خواهد شد.
کلیدواژه ها
 
Title
The first report of the endophytic fungus Syncephalastrum racemosum from the sea lettuce (Ulva sp.) in the world
Authors
Maryam Besharati fard, S. Ali moosawijorf, Masoomeh Shams Ghahfarokhi, Mehdi Razzaghi-Abyaneh
Abstract
The study aimed to isolate and identify endophytic fungi from marine lettuce seaweed (Ulva sp.). The Syncephalastrum genus belongs to the Mucorales order. According to the Index Fungorum system (www.indexfungorum.org), the Syncephalastrum genus is composed of two species: S. racemosum and S. monosporum. The samples were surface disinfected using a multi-stage disinfection method including 70% ethanol (1 minute), once washing with sterile distilled water, again 70% ethanol (15 seconds) and three times washing with sterile distilled water. To confirm the correct disinfection of the surface of the last washing water, the samples were cultured on PDA culture medium. After drying, the samples were divided into small pieces and cultivated in PDA medium containing Sea lettuce extract (200 ml/liter). They were then kept in an incubator at 25 degrees Celsius for 3 weeks. The grown isolates were purified by the thread tip method. In this research, 3 isolates were isolated. The lack of growth of fungi in Petri dishes cultured with water from the third wash showed the effectiveness of surface disinfection. Identification of the isolates was done based on the morphological characteristics and the sequence of the ITS region. Based on the morphological characteristics of these isolates, they produced a significant amount of aerial mycelium on the PDA culture medium, which grew very rapidly. The color of the colony was white at first and turned into dark gray and then black as a result of sporulation. They produced straight, simple to branched sporangiophores (diameter 3-4 micrometers), which were spherical to oval vesicles (diameter 11-16 micrometers) brown in color. Directly on their surface were sporangia. The radial face consisted of cylindrical rows containing 1-8 sporangiospores. Sporangiospores with smooth walls were Ovoid, Spherical, Oval, Cylindrical and other various shapes (2-6 µm in diameter). Using the primers ITS1 and ITS4, a 621 base pair fragment was amplified for the desired isolate.The sequence of the desired isolate had 100% nucleotide similarity with the sequence of the isolate with S. racemosum species. The examination of the morphological features combined with the results of the ITS sequencing analysis confirmed that the isolated fungal samples belong to the fungus S. racemosum. The fungal species identified in this research is reported for the first time in Iran and the world from the algae Ulva sp. The evolutionary relationship of the studied isolate with the isolates of this species and other species of the Syncephalastrum genus available in the Genebank and authoritative articles is being completed and will be published in future reports.
Keywords
Endophyte fungus, Sea lettuce algae, S. racemosum, Bandar Abbas