ارزیابی وضعیت آلودگی خشکبار استان خراسان شمالی به Aspergillus section Flavi و ارزیابی توان توکسین‌زایی تعدادی از جدایه‌ها

پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 1130-25IPPC (R1)
نویسندگان
1گرگان-کوی دادگستری-کوچه سوم-مجتمع ستاره
2عضو هیات علمی
31- بخش تحقیقات علوم زراعی و باغی، مرکز تحقیقات و آموزش کشاورزی و منابع طبیعی استان سمنان(شاهرود)، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، شاهرود، ایران
چکیده
آفلاتوکسین‌ها، گروهی بزرگی از زهرابه‌های قارچی هستند که مطالعات بسیار گسترده‌ای بر روی آنها انجام گرفته است و جزء مواد بسیار سمی و سرطان‌زا می‌باشند. از زمان کشف آفلاتوکسین در دهه 1960، قارچ Aspergillus flavus به‌عنوان متداول‌ترین قارچ آلوده‌کننده مواد غذایی به‌خصوص خشکبار در منابع علمی همواره ذکر گردیده است، که نشانگر اهمیت اقتصادی این قارچ می‌باشد. مطالعه حاضر به-منظور بررسی وضعیت آلودگی خشکبار (پسته، بادام و گردو) به Aspergillus section Flavi در استان خراسان شمالی و ارزیابی توان توکسین‌زایی جدایه‌ها صورت گرفت. جهت مقایسه میزان آلودگی مغز خشکبار به قارچ مذکور، تعداد 20 نمونه پسته، 20 نمونه بادام و 10 نمونه گردو از شهرهای مختلف این استان گرفته شد. نمونه‌ها پس از آسیاب، به‌روش کشت رقتی در سطح پتری‌های حاوی محیط کشت اختصاصی AFPA کشت شدند (طرح کاملا تصادفی در سه تکرار). سه الی پنج روز بعد از کشت، کلنی‌های Aspergillus section Flavi جداسازی، شناسایی و شمارش گردیدند و فراوانی آنها در نمونه‌های مختلف با هم مقایسه شد. برای شناسایی مرفولوژیکی جدایه های Aspergillus بخش فلاوی از ویژگی‌هایی همچون شکل، رنگ و اندازه کنیدیوم، کنیدیوفور، وزیکول و سلول پایه و همچنین مشخصات استریگماتا، رشد در محیط‌های کشت و دماهای مختلف استفاده گردید (Klich, 2002). نتایج بدست‌آمده نشان‌ داد که میزان آلودگی به Aspergillus section Flavi در نمونه‌های مختلف پسته و بادام، متفاوت از یکدیگر است به‌طوری‌که از 20 نمونه پسته مورد آزمایش، 12 نمونه (60 %) آلوده و از 20 نمونه بادام، 6 نمونه (%30) آلوده به Aspergillus section Flavi بودند. همچنین به‌منظور ارزیابی و تعیین پتانسیل تولید آفلاتوکسین در جدایه‌های مختلف، یک میلی‌لیتر از سوسپانسیون اسپور قارچ از هر جدایه (به غلظت 103 اسپور در میلی‌لیتر) بر روی 22 گرم برنج خرد‌شده استریل کشت گردید و یک هفته در درجه حرارت 28 درجه سانتی‌گراد نگهداری گردید. بعد از این مدت، آفلاتوکسین تولید‌شده بر روی برنج، توسط کلروفرم استخراج گردید. نوع و میزان آفلاتوکسین تولید‌شده توسط روش کروماتوگرافی لایة نازک (TLC) اندازه‌گیری شد. نتایج آزمایشات انجام‌شده نشان‌ داد که از 50 جدایه Aspergillus section Flavi که در این تحقیق مورد ارزیابی قرار گرفت، 42 جدایه یعنی 84% جدایه‌ها قادر به تولید یک یا چند نوع آفلاتوکسین (B1، B2، G1 و G2) بوده و 8 جدایه یعنی 16% جدایه‌ها قادر به تولید هیچ نوع آفلاتوکسینی نبودند. در بین جدایه‌های توکسین‌زا نیز دامنه تولید آفلاتوکسین B1 بین 50 تا ppb10358، آفلاتوکسین B2 بین 21 تا ppb3017، آفلاتوکسین G1 بین 112 تا ppb2362 و آفلاتوکسین G2 بین 64 تا ppb249 متغیر بود.
کلیدواژه ها
 
Title
Evaluation of nut contamination to Aspergillus section Flavi in North Khorasan province and determination of the capability to produce aflatoxin by isolates
Authors
Ali Kaveh, Majid Aldaghi, Mehdi Mohammadi-Moghadam
Abstract
Alfatoxins are a large group of mycotoxins that have been extensively studied and are among the most toxic and carcinogenic substances. Since the discovery of aflatoxin in the 1960s, Aspergillus flavus has always been mentioned as the most common fungus contaminating food, especially dried fruit, in scientific references, which indicates the economic importance of this fungus. The present study was conducted in order to investigate the contamination status of dried-fruits (pistachios, almonds and walnuts) to Aspergillus section Flavi in North Khorasan province and to evaluate the toxin-producing ability of the isolates. In order to compare the level of contamination of dried-fruit kernels to the aforementioned fungus, 20 samples of pistachios, 20 samples of almonds, and 10 samples of walnuts were taken from different cities of this province. The samples were ground and then cultured on AFPA, as a selection medium, using dilution culture method. Three to five days after cultivation, Aspergillus section Flavi colonies were isolated, identified and counted; and their relative abundance in different samples was compared. Characteristics such as shape, color and size of conidium, conidiophore, vesicle and basal foot cell, as well as characteristics of strigmata, growth in different culture media and temperatures were used for morphological identification of Aspergillus section Flavi isolates (Klich, 2002). The obtained results indicated that the rate of contamination to Aspergillus section Flavi in different samples of pistachio and almond is varied from each other, so that out of 20 pistachio samples tested, 12 cases (60%), and out of 20 almond samples, 6 cases (30%) were infected with Aspergillus section Flavi. Also, in order to evaluate and determine the potential of aflatoxin production in different isolates, one milliliter of the suspension of spore from each isolate (at a concentration of 103 spores per milliliter) was cultured on 22 grams of sterile chopped rice and was kept for one week at 28°C. After this period, aflatoxin produced on rice was extracted by chloroform. The type and amount of aflatoxin produced was measured by thin layer chromatography (TLC). The results of the experiments showed that out of 50 isolates of Aspergillus section Flavi that were evaluated in this research, 42 isolates (84%) were able to produce one or more types of aflatoxin (B1, B2, G1 and G2), and 8 isolates (16%) were unable to produce any type of aflatoxin. Among the toxin-producing isolates, the range of aflatoxin B1 production ranged from 50 to 10358 ppb, aflatoxin B2 from 21 to 3017 ppb, aflatoxin G1 from 112 to 2362 ppb, and aflatoxin G2 from 64 to 249 ppb.
Keywords
pistachio, Almond, Walnut, Aspergillus, Aflatoxin