شناسایی قارچ بیماریزای کاج در شهر تهران
پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 1121-25IPPC (R1)
نویسندگان
1شهرداری تهران و دانشگاه زنجان
2رییس مرکز تام منطقه 21
3دانشگاه زنجان
چکیده
به منظور شناسایی عامل قارچی دخیل در سرخشکیدگی درختان کاج در شهر تهران در فصلهای مختلف سال 1402 از درختان کاج در چند بوستان دارای نشانههای بیماری، نمونهبرداری و جداسازی قارچها صورت گرفت. نمونههای ارسالی به آزمایشگاه با جریان آب روان کاملا شستسو شدند و جهت جداسازی قارچها، قطعاتی از نواحی ریشه، طوقه، برگ و ساقه حد فاصل بافت سالم و آلوده جدا نموده و به مدت 5-3 دقیقه در محلول هیپوکلرید سدیم یک درصد ضدعفونی سطحی و سپس سه بار با آب مقطر استریل شستشو شدند و رطوبت آنها توسط کاغذ صافی خشک کن استریل گرفته شد. سپس این قطعات بر روی محیط کشت PDA (سیب زمینی-دکستروز-آگار) کشت و در محیط کشت WA (آب-آگار) خالص سازی شدند. پس از خالص سازی مجددا یک قطعه از حاشیه فعال میسلیوم در حال رشد درون پتری حاوی PDA (سیب زمینی-دکستروز-آگار) کشت شد و در انکوباتور به مدت ده روز در دمای 25 درجه سانتیگراد قرار گرفتند. شناسایی جدایههای قارچی با استفاده از کلید قارچشناسی نلسون و همکاران (1983) و سیفرت (1996) با تهیه اسلاید میکروسکوپی و براساس ویژگیهای میکروسکوپی مانند: شکل، اندازه، وجود یا عدم وجود میکروکنیدی و شکل آن، وجود و عدم وجود کلامیدوسپور، دارا بودن یا عدم وجود زنجیره میکروکنیدی و ویژگیهای ظاهری رنگ کلنی قارچ به ویژه از سطح زیرین و نرخ رشد کلنی انجام شد. در نتیجه 10 جدایۀ قارچی از گونهی Fusarium solani به دست آمد. اثبات بیماریزایی عامل بیماری به روش آلوده کردن نهالهای کاج یک ساله در فضای آزاد انجام گرفت بدین صورت که چند دیسک از پرگنه در حال رشد قارچ در خاک گلدانها (اطراف طوقه و ریشه نهال) قرار داده شد. بیماری-زایی پس از دو ماه با ایجاد زخم در محل طوقه، ریشه و زردی و خشکیدگی در سوزنهای نهال ها به اثبات رسید. از نهالهای مایه زنی شده که نشانههای بیماری داشتند دوباره قارچ مذکور جداسازی و شناسایی شد. درستی جدایههای شناسایی شده با روش شناسایی مولکولی با توالی یابی ITS-rDNA نیز تأیید شد.
کلیدواژه ها
Title
Identification of pine pathogenic fungi in Tehran
Authors
maedeh morid, Zeinab Nasiri, roghayeh hemati
Abstract
In order to identify the fungal agent involved in the red rot of pine trees in Tehran in different seasons of 1402, sampling and isolation of fungi were done from pine trees in several parks with disease symptoms. The samples sent to the laboratory were thoroughly washed with running water, and in order to separate the fungi, parts of the root, crown, leaf, and stem areas between healthy and infected tissue were separated and immersed in sodium hypochlorite solution for 3-5 minutes. The percentage of surface disinfection and then they were washed three times with sterile distilled water and their moisture was taken by sterile filter paper. Then these parts were cultured on PDA (potato-dextrose-agar) medium and purified in WA (water-agar) medium. After purification, a piece of the active margin of the growing mycelium was cultivated in a petri dish containing PDA (potato-dextrose-agar) and placed in an incubator for ten days at 25 degrees Celsius. Identification of fungal isolates using the mycological key of Nelson et al. (1983) and Seifert (1996) by preparing microscopic slides and based on microscopic characteristics such as: shape, size, presence or absence of microconidia and its shape, presence and Absence of chlamydospore, presence or absence of microconidia chain and appearance characteristics of mushroom colony color especially from the bottom surface and colony growth rate were done. As a result, 10 fungal isolates of Fusarium solani species were obtained. The proof of the pathogenicity of the disease agent was done by infecting one-year-old pine seedlings in the open air, in such a way that several discs of the growing fungus were placed in the soil of the pots (around the crown and root of the seedling). Pathogenicity was proved after two months by the formation of wounds in the crown, roots and yellowing and drying in the needles of the seedlings. The mentioned fungus was isolated and identified from the inoculated seedlings that had disease symptoms. The correctness of the isolates identified by molecular identification method was also confirmed by ITS-rDNA sequencing.
Keywords
Coniferous trees, Red break, Fusarium sp