شناسایی و تعیین ویژگی های مولکولی فیتوپلاسمای همراه زردی و ریز برگی هلو در استان گلستان
پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 1243-25IPPC (R1)
نویسندگان
1گروه گیاه پزشکی، دانشکده تولیدات گیاهی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان
2دانشیار گروه گیاه پزشکی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان
چکیده
در بازدیدهای بهار و تابستان سال های 1400 و 1401 از باغات درختان میوه در استان گلستان، علائم زردی، قرمز شدن برگ، زوال، پیچ خوردگی برگ و ریز برگی در درختان هلو در سطح باغات مشاهده شد. نمونه های دارای علائم فوق از باغات جمع آوری و برای شناسایی عامل بیماری به آزمایشگاه منتقل شدند. عامل بیماری به وسیله پیوند به گیاه محک پروانش انتقال یافت و در گیاه مایه زنی شده با پیوند، علائم زردی و بدشکلی برگ مشاهده شد. پس از استخراج DNA از نمونه های دارای علائم با استفاده از کیت استخراج ژنومیکس گیاهی شرکت دنازیست آسیا، ردیابی عامل بیماری توسط آزمون های PCR معمولی همراه با جفت آغازگر P1/P7 و PCR آشیانهای با جفت آغازگر R16F2n/R16R2 صورت گرفت. قطعههای حدود 1250 جفت بازی حاصل از PCR آشیانهای توسط شرکت توپاز ژن به روش توالی یابی سانگر، توالی یابی شدند. مقایسه توالی های به دست آمده با توالی های موجود در NCBI توسط نرم افزار BLAST شباهت 98% را با گونه ی فیتوپلاسما شناسایی کرده و مقایسه درخت فیلوژنتیک فیلوژنتیک با استفاده از روش Maximum likelihood و مدل تامورای 3 پارامتر در برنامهی Mega-X و بررسی چندشکلی طولی قطعات برشی مجازی ناحیه تکثیر شده از سامانه iphyclassifier نشان داد که فیتوپلاسمای همراه با زردی هلو در استان گلستان مشابه Candidatus Phytoplasma asteris مربوط به گروه زردی گل مینا (Aster Yellows) یا 16SrI-AD میباشد. این اولین گزارش از بیماری زردی، ریز برگی و زوال درختان هلو و تعیین ویژگیهای فیتوپلاسمای همراه با آن در استان گلستان می باشد.
کلیدواژه ها
Title
Identification and characterization of molecular features of phytoplasma associated with peach yellows and little leaf in Golestan Province
Authors
Mohammadreza Zarhoon, saeed Nasrollahnejad
Abstract
During the spring and summer visits of the years 2021 and 2022 to the fruit orchards in Golestan province, symptoms of yellowing, leaf reddening, decline, leaf curling, and stunted leaves were observed in peach trees across the orchards. Samples showing these symptoms were collected from the orchards and transferred to the laboratory for identification of the disease agent. The disease agent was transmitted to the periwinkle indicator plant by grafting, and in the inoculated plant with the graft, symptoms of yellowing and leaf deformation were observed. After extracting DNA from the symptomatic samples using the plant genomics extraction kit from Denazist Asia, the disease agent was tracked using conventional PCR tests with the primer pair P1/P7 and nested PCR with the primer pair R16F2n/R16R2. Approximately 1250 base pair fragments obtained from nested PCR were sequenced using the Sanger sequencing method by Topaz Gene Company. Comparison of the obtained sequences with the sequences available in NCBI using BLAST software identified a 98% similarity with the phytoplasma species. Phylogenetic tree comparison using the Maximum Likelihood method and the Tamura 3-parameter model in Mega-X software, and the examination of virtual restriction fragment length polymorphism (RFLP) of the amplified region using the iphyclassifier system, showed that the phytoplasma associated with peach yellowing in Golestan province is similar to Candidatus Phytoplasma asteris belonging to the Aster Yellows group (16SrI-AD) . This is the first report of peach yellowing, leaf stunting, and tree decline disease and the characterization of the associated phytoplasma in Golestan province .
Keywords
Aster Yellows phytoplasma, nested PCR, Molecular detection