پراکنش Xanthomonas phaseoli pv. phaseoli عامل سوختگی معمولی باکتریایی لوبیا در ایران

پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 1283-25IPPC
نویسندگان
1دانشگاه شیراز
2استاد دانشگاه شیراز
3هیات علمی
4دکترا
5پردیس کشاورزی دانشگاه تهران، گروه گیاه پزشکی
چکیده
حبوبات از جمله لوبیا یکی از مهم‌ترین منابع پروتئینی در رژیم غذایی بسیاری از مردم در کشورهای مختلف از جمله ایران می‌باشد. یکی از مهمترین باکتری‌های خسارت‌زا در لوبیا باکتری Xanthomonas phaseoli pv. phaseoli می‌باشد. این بیمارگر بذرزاد بوده و عامل سوختگی معمولی باکتریایی در لوبیا می‌باشد. در طی سال‌های 1401 و 1402 از مزارع لوبیا با علائم مشکوک به سوختگی باکتریایی در اکثر مناطق ایران از جمله استان‌های فارس، کهگیلویه و بویراحمد، لرستان، مرکزی، قزوین، چهار محال و بختیاری و کرمانشاه نمونه‌برداری شد. جداسازی باکتری مطابق با روش‌های مرسوم در باکتری شناسی روی محیط کشت نوترینت آگار انجام شد. بعد از 72-48 ساعت، پرگنه‌های زرد رنگ، برجسته و شفاف رشد کردند. نتایج آزمون‌های بیوشیمیایی نشان داد که باکتری‌های جداسازی شده گرم منفی، اکسیداز منفی و هوازی اجباری می‌باشند و قادر به هیدرولیز آسکولین، تویین 80 و کازئین می‌باشند. این باکتری‌ها بعد از 24 ساعت از مایه‌زنی قادر به القا واکنش فوق حساسیت در گیاهان توتون بودند. نتایج آزمون‌های بیوشیمیایی نشان داد که جدایه‌‌ها به Xanthomonas spp. تعلق دارند و تشخیص نهایی آن‏ها با استفاد از آغازگر اختصاصی جنس زانتوموناس (Xc-lip-F2/Xc-lip-R2) و تکثیر قطعه 777 جفت بازی تأیید شد. مطالعات فیلوژنی با استفاده از تعیین توالی چهار ژن حفاظت شده atpD، dnaK، gyrB و rpoD نشان داد که جدایه‌های مورد بررسی در این تحقیق به X. phaseoli pv. phaseoli تعلق دارند. آزمون بیماری‌‌زایی تمامی جدایه‌ها به صورت اسپری‌پاشی روی گیاهان لوبیا در شرایط گلخانه انجام شد. بعد از گذشت دو هفته از مایه‌زنی لکه‌های آب سوخته با هاله زرد رنگ در سطح رویی و زیرین برگ‌ها ایجاد شد. باکتری‏های مایه‏زنی شده بعد از نشان دادن علائم دوباره جداسازی شدند و تشخیص آن‏ها با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ذکر شده برای زانتوموناس انجام شد. در نهایت آزمون‌های بیوشیمیایی، مولکولی و بیماری‌زایی نشان داد که عامل بلایت هاله‌ای لوبیا در استان‌های مختلف کشور، به صورت گسترده وجود دارد.
کلیدواژه ها
 
Title
Distribution of Xanthomonas phaseoli pv. phaseoli causing common bacterial blight of beans in Iran
Authors
Nasrin Yaghoobi, S. Mohsen Taghavi, Sadegh Zarei, Hamzeh Mafakheri, Ebrahim Osdaghi
Abstract
Legumes, including beans, are one of the most important sources of protein in the diet of many people in different countries, including Iran. Common bacterial blight of beans caused by the Xanthomonas phaseoli pv. phaseoli is one of the most destructive seed-borne diseases on beans. During the years 2022 and 2023, samples were collected from bean fields in the majority of regions across Iran, including Fars, Kohgiluyeh-Boyer-Ahmad, Lorestan, Markazi, Qazvin, Chaharmahal and Bakhtiari, and Kermanshah provinces. Bacterial isolation was conducted in accordance with standard bacteriological procedures on nutrient agar (NA) medium. After 48-72 hours, pale-yellow, domed, and circular colonies were appeared on NA medium. The results of biochemical tests revealed that all bacterial strains are positive for hydrolysis of aesculin, tween 80, casein and induce of hypersensitive reaction on tobacco plants, while they were negative for gram, anaerobic growth and oxidase tests. The results of biochemical tests showed that the all bacterial strains are belong to Xanthomonas spp. The primer pair Xc-lip-F2/Xc-lip-R2 specific for Xanthomonas spp. directed the amplification of the expected 777 bp fragment in all bacterial strains. Phylogenetic analysis using sequencing of four housekeeping genes (atpD, dnaK, gyrB, and rpoD) showed that the all bacterial strains obtained in this study belong to X. phaseoli pv. phaseoli. The pathogenicity test for all bacterial strains was conducted by spraying bacterial suspension on bean plants in greenhouse conditions. After two weeks of inoculation, water-soaked lesions with a yellow halo appeared on both the upper and lower surfaces of the leaves. The bacterial strains were isolated again from inoculated plants after showing symptoms, and their identification was carried out using specific Xc-lip-F2/Xc-lip-R2 primers for Xanthomonas. Finally, the biochemical, molecular, and pathogenicity tests indicated that the halo blight agent of beans is present in various provinces of the country.
Keywords
Bean, common bacterial blight, phylogeny and pathogenicity