اولین گزارش از ویروس پالامپور پیچیدگی برگ گوجه‌فرنگی (ToLCPMV) در مزارع فلفل استان خوزستان

پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 1307-25IPPC
نویسندگان
1گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه لرستان، خرم‌آباد، ایران
2بخش تحقیقات گیاهپزشکی، مرکز تحقیقات و آموزش کشاورزی و منابع طبیعی استان خراسان رضوی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، مشهد، ایران.
چکیده
ویروس پالامپور پیچیدگی برگ گوجه‌فرنگی (ToLCPMV) یک ویروس مهم با ژنوم دوبخشی از جنس Begomovirus و خانواده Geminiviridae است که در سال-های اخیر در ایران به‌خصوص در مناطق جنوبی گسترش یافته است. این ویروس اولین بار از هند و سپس از پاکستان، عراق، عمان و عربستان نیز گزارش شد. به منظور ردیابی این ویروس، نمونه‌برداری در طول فصل‌های بهار و تابستان از مزارع فلفل شهرستان‌های استان خوزستان شامل دزفول، شوشتر و اندیمشک، که با مشکل Bemisia tabasi مواجه بودند، انجام شد. استخراج DNA به روش CTAB و آزمون زنجیره‌ای پلیمراز با کمک کیت PCRBio system و یک جفت آغازگر دژنره جنسBegomvirus مربوط به ژن پیش‌ساز پروتئین پوششی روی قطعه DNA-A انجام و منجر به تکثیر قطعه 550 جفت‌بازی در نمونه‌های جمع‌آوری شده از هر سه شهرستان شد. این قطعات توالی‌یابی و به کمک ابزار nBlast ارزیابی شدند. همچنین آزمون PCR با استفاده از آغازگرهای اختصاصی گونه با تکثیر حدود 950 جفت باز از DNA-B شامل بخشی از ژن پروتئین حرکتی و ناحیه بین ژنی و نیز تعیین ترادف نوکلئوتیدی ناحیه تکثیر شده و مقایسه آن‌ها با سایر توالی‌های موجود در بانک ژن به کمک ابزار nBlast، وقوع ToLCPMV را در مزارع مورد مطالعه تأیید کرد. هم‏ردیف‏سازی چندگانه توالی‏های ژنومی با استفاده از ابزار ClustalW در نرم‏افزار Mega11 صورت گرفت و سپس درخت فیلوژنی با روش اتصال همسایگی و براساس 1000 تکرار در ارزیابی رسم شد. همچنین ماتریکس مقایسه دو به دوی توالی‌ها و تجزیه و تحلیل تشابه توالی‌های نوکلئوتیدی ناحیه ژنومی مورد مطالعه بین جدایه‌های توالی‌یابی شده و بانک ژن با استفاده از نرم‌افزار SDT v1.2 صورت گرفت. در درخت فیلوژنی رسم شده براساس توالی نوکلئوتیدی ناحیه ژن پروتئین حرکتی، جدایه‌ها در دو گروه I و II قرار گرفتند. نتایج نشان داد که جدایه‌های توالی‌یابی شده مطالعه حاضر همراه با دیگر جدایه‌های ایرانی مانند سه جدایه از استان خوزستان روی هندوانه و جدایه‌های کرمان و جیرفت در گروه I قرار گرفتند. جدایه‌های عراق و عربستان سعودی در این گروه کنار جدایه‌های ایرانی طبقه‌بندی شدند. جدایه‌های هند و پاکستان به طور جداگانه در گروه II قرار گرفتند. براساس آنالیزهای نرم‌افزار SDT جدایه‌های خوزستان 8/99 درصد با یکدیگر شباهت داشتند. این جدایه‌ها بیشترین شباهت (7/97 درصد) و کمترین فاصله ژنتیکی را با جدایه‌های عراق ( OP810507و OP620406) و عربستان (OL416214 و ON843664) داشتند. کمترین شباهت جدایه‌های خوزستان با جدایه هند روی بادمجان (OM315020) با 1/89 درصد شباهت بود. این اولین گزارش از وقوع ToLCPMV در مزارع فلفل استان خوزستان می‌باشد.
کلیدواژه ها
 
Title
The first report of Tomato Leaf Curl Palampur Virus (ToLCPMV) in pepper fields of Khouzestan province
Authors
Maryam Abas Nejhad1, Samira Pakbaz, Ehsan Hasanvand, Sara Gharouni Kardani
Abstract
Tomato leaf curl Palampur virus (ToLCPMV) is an important virus with bipartite genome of genus Begomovirus and family Geminiviridae, which has spread in recent years in Iran, especially in southern regions. This virus was first reported from India and then from Pakistan, Iraq, Oman and Saudi Arabia. In order to detection this virus, sampling was carried out during the spring and summer seasons from pepper fields in the cities of Khouzestan province, including Dezful, Shoushtar and Andimeshk, which had a high population of Bemisia tabasi. DNA extraction by CTAB method and polymerase chain reaction (PCR) using PCRBio system kit and a pair of Begomvirus degenerate primers related to pre-coat protein gene (PCRv181/Bc) on DNA-A fragment carried out and resulted in the amplification of 550bp fragments in the samples collected from all three cities. These fragments were sequenced and evaluated using nBlast tool. Also, PCR assay using species-specific primers by amplifying a fragment of about 950bp of DNA-B including a part of the movement protein gene and the intergenic region, as well as determining the nucleotide sequence of the amplified region and comparing them with other sequences in the gene bank using nBlast tool confirmed the occurrence of ToLCPMV in the studied fields. Multiple sequence alignment of genomic sequences was done using ClustalW tool in Mega11 software and then a phylogeny tree was drawn by Neighbor joining method and based on 1000 repetitions in bootstrap evaluation. Also, the pairwise comparison matrix of the sequences and the analysis of the nucleotide sequence similarity of the studied genomic region between the sequenced isolates and the gene bank were performed using SDT v1.2 software. In the phylogenetic tree based on the nucleotide sequence of ToLCPMV movement protein gene region, isolates were classified into groups I and II. The results showed the sequenced isolates in this study, along with other Iranian isolates such as three isolates from Khouzestan province on watermelon and isolates from Kerman and Jiroft, were classified in group I. Iraq and Saudi Arabia Isolates were classified in this group alongside Iranian isolates. India and Pakistan isolates were separately placed in group II. According to the SDT software analyses, Khouzestan isolates had the similarity of 99.8% to each other. These isolates had the highest similarity (97.7%) and the least genetic distance with Iraq OP810507 and OP620406 isolates and Saudi Arabia OL416214 and ON843664 isolates. There was the lowest similarity between Khouzestan isolates and Indian isolate on eggplant (OM315020) with 89.1% similarity. This was the first report of ToLCPMV occurrence in pepper fields of Khouzestan Province.
Keywords
Begomovirus, Detection, Khouzestan, pepper