قارچ‌های همراه با سرخشکیدگی درختان کاج تهران (Pinus eldarica Medw.) در استان کرمان

پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 1343-25IPPC
نویسندگان
1دانشگاه شهید باهنر کرمان
2عضو هیات علمی
چکیده
کاج تهران (Pinus eldarica Medw.) یکی از مهمترین گونه‌های درختان زینتی در مناظر و فضای سبز شهری است. اخیرا سرخشکیدگی شدیدی روی درختان کاج تهران در برخی از مناظر شهرستان کرمان مشاهده شده است. بنابراین، مطالعه حاضر به منظور جداسازی و شناسایی گونه‌های قارچی مرتبط با درختان کاج با نشانه‌های بیماری انجام شد. نمونه‌های چوبی از شاخه‌های درختان با نشانه‌های سرخشکیدگی در مناطق مختلف چشم‌انداز شهر کرمان در طی سال‌های 1401-1402 جمع‌آوری شد. قطعات چوبی ( 5 تا 10 سانتی‌متر) از شاخه‌های بیمار بریده شد و جداسازی قارچ‌ها از نشانه‌های مختلف تغییر رنگ بافت داخلی چوب انجام گردید. در مرحله بعد تکه‌های کوچک (5-3 میلی‌متر) از حاشیه بین بافت‌های چوب سالم و تغییر رنگ یافته بافت چوب تهیه شد. این قطعات به مدت یک تا دو دقیقه در محلول هیپوکلریت سدیم 1.5 درصد (NaOCl) ضدعفونی و سپس دو بار با آب مقطر استریل شستشو داده شدند. تمام قطعات ضد عفونی شده در هوا خشک شدند و سپس روی محیط کشت عصاره سیب زمینی-دکستروز- آگار (PDA) قرار داده شدند. تشتک‌های پتری جهت رشد پرگنه‌های قارچی در دمای 25 درجه سلسیوس نگهداری و مورد بررسی قرار گرفتند. کشت‌های خالص با انتقال نوک ریسه یا تک اسپور‌ها به محیط کشت جدید PDAبه دست آمدند. شناسایی اولیه جدایه‌های قارچی بر اساس ویژگی‌های محیط کشت و ریخت شناسی انجام شد. استخراج دی ان ا (DNA) با استفاده از دستورالعمل CTAB انجام و شناسایی‌ ریخت شناختی جدایه‌های نماینده بر اساس تکثیر و واکاوی توالی‌های مربوط به ناحیهnrDNA (ITS) و بخشی از ژن‌های β-توبولین (tub2) و فاکتور بسط دهنده ترجمه یک آلفا (tef-1α) به ترتیب با استفاده از آغازگرهای ITS1/ITS4 ،T1/ Bt2b و EF1-728F/ EF1-986R انجام شد. بر اساس واکاوی داده‌های ریخت شناختی و مولکولی، گونه‌های Lasiodiplodia theobromae، Epicoccum layuense، Pestalotiopsis parva، Inocutis levis، Phaeoacremonium alvesii،Phaeoacremonium rubrigenum و یک گونه از Diatrypacea از درختان کاج تهران با نشانه‌های سرخشکیدگی در شهر کرمان جداسازی و شناسایی شدند. بر اساس اطلاعات موجود، گونه های شناسایی شده در این تحقیق (به استثنای P. alvesii) برای اولین بار روی P. eldarica در دنیا گزارش می شوند.
کلیدواژه ها
 
Title
Fungi associated with dieback of Tehran pine trees (Pinus eldarica Medw.) in Kerman Province
Authors
somayeh rahmani, Hamid Mohammadi
Abstract
Tehran pine (Pinus eldarica Medw.) is one of the most important ornamental tree species in urban green spaces. A sever dieback of Tehran pine trees has recently been observed in some green spaces of Kerman county. Therefore, the current study was carried out in order to isolate and identify the fungal species associated with pine trees showing disease symptoms. Woody samples were collected from the branches of trees with dieback symptoms at different landscape areas during 2022-2023. Wood segments were cut from the affected branches and fungal isolations were made from various internal wood symptoms. Small wood pieces (3-5 mm) were cut from the margin between healthy and discoloured wood tissues, surface-disinfected for 1-2 min in a 1.5 % sodium hypochlorite (NaOCl) solution, and washed twice with sterile distilled water (SDW). All disinfected wood segments allowed to air dry and then were plated potato dextrose agar (PDA). Petri plates were incubated at 25 and checked for fungal growth colonies. Pure cultures were obtained by transferring hyphal tips or single spores onto fresh PDA plates. Preliminary identification of fungal isolates was performed based on cultural and morphological characteristics. DNA was extracted using a CTAB protocol and morphological identifications of the representative isolates were confirmed by sequence analysis of the internal transcribed spacer (ITS) nrDNA and a partial β-tubulin (tub2) and the translation elongation factor 1α (tef-1α) gens using ITS1/ITS4, T1/Bt2b, and EF1-728F/EF1-986R primer sets, respectively. Based on morphological and molecular data analyses, Lasiodiplodia theobromae, Epicoccum layuense, Pestalotiopsis parva, Inocutis levis, Phaeoacremonium alvesii, Phaeoacremonium rubrigenum and a Diatrypaceae sp. were recovered and identified from Tehran pine trees showing dieback symptoms in Kerman county. Based to our knowledge, most of the fungal species identified in this research (with the exception of P. alvesii), are reported for the first time on P. eldarica worldwide.
Keywords
Keywords: Fungal pathogens, Green space, Molecular studies, ornamental plants