تولید و ارزیابی یک لاین سلولی از سلولهای جنینی کرم غوزه پنبه Helicoverpa armigera (Hübner)
پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 1317-25IPPC
نویسندگان
1دانشجو
2گروه گیاهپزشکی دانشکده کشاورزی دانشگاه گیلان
چکیده
کرم غوزهی پنبه، Helicoverpa armigera (Hübner)، آفتی پلیفاژ است که در اکثر نقاط دنیا مشاهده میشود و به محصولات زیادی در ایران و سایر نقاط جهان خسارت وارد میکند.کشت سلولی حشرات به عنوان یک روش نوین و ارزشمند برای ارزیابی سمیت سلولی حشرهکشهای نوپدید در مراحل اولیه آزمایشها، تولید پروتئینهای نوترکیب و درک بهتر بیولوژی حشرات مورد استفاده قرار میگیرد. این روش در مقایسه با پرورش حشرات زنده، از نظر زمان و هزینه بسیار مقرون به صرفهتر است. در این پژوهش، کشت اولیه از سلولهای جنینی کرم غوزهی پنبه Helicoverpa armigera (Hübner) با استفاده از روش هموژنیزه کردن بافت، در محیط کشت سلولی TC100 غنی شده با 10% سرم جنین گاوی انجام شد. در کشت اولیه، از لحاظ ریختشناسی، بیشتر سلولها شامل سلولهای کروی و دوکی شکل بودند. اولین پاساژ سلولها پس از گذشت 30 روز و با تشکیل تک لایه سلولی در فلاسکهای کشت، انجام شد. پس از 21 پاساژ سلولی، سلولها پایدار شده و رده سلولی GU-Ha-EA1 نامگذاری گردید. منحنی رشد این رده سلولی در پاساژ بیستم ابتدا با شیب کم و سپس با شیب تند و صعودی افزایش یافت. زمان دو برابر شدن جمعیت سلولی این لاین، در پاساژ بیستم در دمای 27 درجه سلسیوس معادل 19/53 ساعت گزارش شد. کاریوتیپ این رده سلولی شامل کروموزومهای کوچک و متعدد بود و بیشتر سلولها به نظر تتراپلوئید یا اکتاپلوئید بودند. نتایج این پژوهش نشان داد که ایجاد رده سلولی از سلولهای جنینی کرم غوزه پنبه امکان انجام پژوهشهای جدید و کاربردی روی فرآیندهای بیولوژیک نظیر فیزیولوژی سلولی و ایمونولوژی این آفت و دیگر بالپولکداران را فراهم میسازد. علاوه بر این، میتواند در زمینه پژوهشهای گسترده روی آفتکشهای نوپدید موثر بر این آفت، مورد استفاده قرار گیرد.
کلیدواژه ها
Title
Establishment and Evaluation of a Cell Line from Embryonic Cells of the Cotton Bollworm Helicoverpa armigera (Hübner)
Authors
Zahra Afrazeh, Jalal Jalali Sendi
Abstract
The cotton bollworm, Helicoverpa armigera (Hübner), is a polyphagous pest observed in most parts of the world. It causes damage to numerous crops in Iran and other regions globally. Insects cell culture is a novel and valuable method used for early-stage evaluation of the cytotoxicity of new insecticides, production of recombinant proteins, and better understanding insect biology. Compared to rearing live insects, this method is cheaper in terms of time and cost. In this study, a primary culture from embryonic cells of the cotton bollworm H. armigera was established using tissue homogenization in TC100 cell culture medium enriched with 10% fetal bovine serum. Morphologically, most cells in the primary culture were spherical and spindle-shaped. The first cell passage was performed after 30 days once a monolayer had formed in the culture flasks. After 21 cell passages, the cells became stable and the cell line was named GU-Ha-EA1. The growth curve of this cell line in the 20th passage initially increased slowly and then steeply. The population doubling time of this cell line at the 20th passage and 27 °C was reported to be 53.19 hours. The karyotype of this cell line consisted of numerous small chromosomes, and most cells appeared to be tetraploid or octaploid. The results of this study indicate that establishing a cell line from embryonic cells of the cotton bollworm enables new and practical research on biological processes such as cellular physiology and immunology of this pest and other Lepidopterans. Additionally, this cell line can be used in extensive research on new insecticides effective against this pest.
Keywords
Cell culture, Embryonic tissue, Growth curve, Doubling time, cotton bollworm