ردیابی ویروس پیچیدگی برگ توته‌ای بامیه و بتاستلایت همراه آن در مزارع بامیه در جنوب شرقی ایران
پذیرفته شده برای ارائه شفاهی
کد مقاله : 1519-25IPPC
نویسندگان
1عضو هیات علمی
2دانشجوی کارشناسی ارشد
3عضو هیئت علمی دانشگاه شهید باهنر کرمان
چکیده
بیماری پیچیدگی برگ توته‌ای بامیه یک بیماری ویروسی مخرب در نواحی کاشت بامیه در دنیا می‌باشد. عامل بیماری ویروس پیچیدگی برگ توته‌ای بامیه (Okra enation leaf curl virus, OELCuV) از جنس Begomovirus و خانوادۀ Geminiviridae می‌باشد که توسط سفیدبالک منتقل می‌شود. در تابستان 1402 علائم توته‌ای و پیچیدگی شدید برگ‌های گیاه بامیه در مزارع شهرستان جیرفت مشاهده شد. استخراج دی اِن اِی کل از گیاهان آلوده انجام شد و با استفاده از آزمون واکنش زنجیره‌ای پلیمراز و آغازگرهای عمومی جنس بگوموویروس و سپس آغازگر اختصاصی OELCuV، آلودگی به این ویروس اثبات گردید. مولکول‌های دی ان اِ حلقوی موجود در یکی از نمونه‌های آلوده به OELCuV (Oka-4)، با استفاده از آنزیم فی 29 دی اِن اِ پلیمراز و کیت تجارتی به روش تکثیر دایرۀ غلتان (آر سی اِ)، غنی‌سازی شد. برش محصول آر سی اِ در نمونۀ مورد بررسی ، با آنزیم برشی HindIII انجام شد و ژنوم کامل ویروس در پلاسمید pGreen0029 همسانه‌سازی و تعیین ترادف گردید. با توجه به شدت علائم در گیاهان بامیه و به منظور اثبات همراهی مولکول‌های بتاستلایت با نمونۀ Oka-4، از آغازگرهای اختصاصی و همپوشان CLCuGBS-F/ CLCuGBS -R و آزمون واکنش زنجیره‌ای پلیمراز برای تکثیر ژنوم کامل بتاستلایت همراه استفاده شد و محصول واکنش زنجیره‌ای پلیمراز به طول تقریبی 4/1 کیلوباز در پلاسمید pTZ57R همسانه سازی و تعیین ترادف گردید. بررسی دو ترادف بدست آمده به طول‌های 2747 و 1355 جفت باز نشان داد که آن‌ها به‌ترتیب متعلق به ویروس پیچیدگی برگ توته‌ای بامیه و بتاستلایت عُمّانی پیچیدگی برگ بامیه (okra leaf curl Oman betasatellite, OLCuOMB) هستند. جدایۀ Oka-4، بیشترین شباهت نوکلئوتیدی را با جدایۀ ایرانی این ویروس از گیاه ریحان از شهرستان جیرفت و بتاستلایت همراه بیشترین شباهت نوکلئوتیدی را با جدایه‌‌ای از این بتاستلایت از عربستان سعودی موجود در بانک ژن نشان دادند. این اولین گزارش از همراهی OLCuOMB و OELCuV در آلودگی طبیعی گیاه بامیه در ایران می‌باشد. ساخت سازه عفونت‌زای ویروس و بتاستلایت همراه به منظور بررسی نقش بتاستلایت در بیماریزایی در حال انجام می‌باشد.
کلیدواژه ها
Title
Detection of okra enation leaf curl virus and the associated betasatellite in okra fields in southeastern Iran
Authors
asra salari, shima heydari, Jahangir Heydarnejad
Abstract
Okra enation leaf curl disease is a destructive viral disease in okra growing areas in the world. The causative agent of the disease is Okra enation leaf curl virus (OELCuV) (genus Begomovirus, Geminiviridae) transmitted by whiteflies. In summer 2024, enation and severe leaf curl symptoms of okra plants were observed in the okra fields in Jiroft. Total DNA were extracted from infected tissues and tested by PCR using degenerate primers of begomoviruses followed by PCR using OELCuV specific primers which confirmed OELCuV infection of samples. The circular DNA molecules of one positive sample (Okra-4) were enriched by phi29 DNA polymerase enzyme and commercial kit using the rolling circle amplification (RCA) method. The RCA product was digested with HindIII restriction enzyme and complete genome of the virus was cloned into the pGreen0029 plasmid and sequenced. Due to severe symptoms of okra samples, possible association of betasatellite molecule with the Okra-4 sample was tested using PCR assay and specific overlapped primer pairs of CLCuGBS-F/CLCuGBS-R. The expected ~1.4 kb in size amplicon was cloned into the pTZ57R plasmid and sequenced. Analysis of 2747 and 1355 bp in size fragments indicated that they belong to OELCuV and okra leaf curl Oman betasatellite (OLCuOMB), respectively. Okra-4 isolate shared maximum nucleotide identity with Iranian isolate of OELCuV previously detected from basil in Jiroft and OLCuOMB isolate with Saudi Arabia isolate available in GenBank. This is the first report of the association of OLCuOMB and OELCuV in natural infection of okra in Iran. The construction of infectious clone of OELCuV and OLCuOMB is in progress to analyze the role of betasatellite in pathogenesis.
Keywords
Begomovirus, Betasatellite, phi29 DNA polymerase, Polymerase chain reaction