شناسائی میزبان‌های زینتی ویروس پیچیدگی برگ‌‌زرد گوجه‌فرنگی و بتاستلایت‌ همراه در جنوب استان کرمان

پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 1520-25IPPC
نویسندگان
1عضو هیات علمی
2دانشجوی کارشناسی ارشد
3عضو هیئت علمی دانشگاه شهید باهنر کرمان
چکیده
ویروس پیچیدگی برگ‌‌زرد گوجه‌فرنگی (Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV) متعلق به جنس Begomovirus و خانوادۀGeminiviridae ، یکی از مخرب‌ترین بگوموویروس‌های آلوده کننده گیاهان اقتصادی در جهان می‌باشد. این ویروس در جنوب استان کرمان دارای پراکنش وسیعی می‌باشد و از میزبان‌های متنوعی گزارش شده است. طی بازدید از فضای سبز شهری، علائم پیچیدگی، بدشکلی و ریزبرگی در گیاهان زینتی گل آهار و گل جعفری در شهرستان جیرفت مشاهده شد. استخراج دی اِن اِی کل به روش CTAB انجام شد و آلودگی نمونه‌ها با استفاده از آزمون واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز و آغازگرهای عمومی بگوموویروس‌ها و سپس آغازگرهای اختصاصی به TYLCV اثبات گردید. مولکول‌های دی ان اِ حلقوی موجود در گل آهار (جدایۀ Zinnia-Jir 2) و گل جعفری (جدایۀ Marigold-Jir4) با استفاده از آنزیم فی 29 دی اِن اِ پلی‌مراز و به روش تکثیر دایرۀ غلتان (آر سی اِ)، غنی‌سازی شد. برش محصول آر سی اِ در دو نمونۀ مورد بررسی، با آنزیم برشی HindIII انجام شد و ژنوم کامل ویروس در پلاسمید pGreen0029 همسانه‌سازی و تعیین ترادف گردید. به منظور بررسی همراهی مولکول‌های بتاستلایت با TYLCV، از آغازگرهای اختصاصی و همپوشان ToLCB-F/ToLCB-R و آزمون واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز برای تکثیر ژنوم کامل بتاستلایت همراه استفاده شد و محصول واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز به طول تقریبی 4/1 کیلوباز در پلاسمید pTZ57R همسانه سازی و تعیین ترادف گردید. بررسی ترادف‌های بدست آمده نشان داد که دو گیاه مورد بررسی به ویروس پیچیدگی برگ‌زرد گوجه‌فرنگی و بتاستلایت پیچیدگی برگ گوجه‌فرنگی (tomato leaf curl betasatellite, ToLCB) آلوده هستند. دو جدایۀ ویروس، بیشترین یکسانی ترادف نوکلئوتیدی را با یکدیگر و با جدایه‌های‌ ایرانی نژاد عمانی این ویروس (TYLCV-OM) از جنوب استان کرمان در میزبان باقلا و سویا نشان دادند. دو جدایۀ بتاستلایت همراه نیز بیشترین یکسانی ترادف نوکلئوتیدی را با یکدیگر و با سایر جدایه‌های ایرانی ToLCB موجود در بانک ژن نشان دادند. این اولین گزارش از آلودگی گیاهان زینتی گل آهار و گل جعفری به TYLCV و بتاستلایت همراه (ToLCB) در جهان می‌باشد. با توجه به گسترش وسیع این ویروس در جنوب استان کرمان، بررسی‌های جامع‌تری در مورد دامنۀ میزبانی آن در بین سایر گیاهان زینتی و نقش بتاستلایت در تشدید بیماریزایی در حال انجام می‌باشد.
کلیدواژه ها
 
Title
Identification of tomato yellow leaf curl virus and the associated betasatellite in ornamental plants of urban green space in south of Kerman province
Authors
asra salari, javad sedaghat-manesh, Jahangir Heydarnejad
Abstract
Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) (Begomovirus, Geminiviridae) is one of the most destructive begomoviruses infecting economic plants in the world. TYLCV has a wide distribution in south of Kerman province and has been reported from various host plants. During a survey, ornamental plants including zinnia and marigold showing yellowing, leaf curl, malformation and leaf distortion symptoms were collected from urban green space of Jiroft. Total DNA were extracted from samples and tested by PCR assay using degenerate primers of begomoviruses followed by PCR using specific primers which confirmed TYLCV infection of the samples. Circular DNA molecules of one positive sample from each plant species were enriched by phi29 DNA polymerase enzyme using commercial kit and rolling circle amplification (RCA) method. RCA products were digested with HindIII restriction enzyme and complete genome of the associated virus with the sample was cloned into the pGreen0029 plasmid and sequenced. Possible association of betasatellite molecule with the two samples (Zinnia-Jir 2 and Marigold-Jir4) were tested using PCR assay and specific overlapped primer pairs of ToLCB-F/ToLCB-R. The expected ~1.4 kb in size amplicon was cloned into the pTZ57R plasmid and Sanger sequenced. Analysis of the full sequences showed that the two ornamental plants are infected with tomato yellow leaf curl virus and tomato leaf curl betasatellite (ToLCB). Two TYLCV isolates shared maximum nucleotide identity with each other and with Iranian strains of TYLCV-OM from south of Kerman province which previously detected in soybean and broad bean. Two ToLCB isolates shared maximum nucleotide identity with other Iranian betasatellites isolates available in GenBank. To the best of our knowledge, this is the first report of infection of the ornamental plants including zinnia and marigold with TYLCV and the associated satellite (ToLCB) in the world. Considering the wide distribution of the virus in south of Kerman province, more studies about natural host range of the virus among other ornamental plants and the role of associated betasatellte molecule in aggravating the disease are in progress.
Keywords
Begomovirus, Betasatellite molecule, Marigold, Urban green space, Zinnia