گزارش جداسازی قارچ Fusarium acuminatum Ellis & Everh. از لارو شب‌پره برگخوار سفید بلوط، Leucoma wiltshirei Coll. (Lepidoptera: Erebidae)

پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 1555-25IPPC (R1)
نویسندگان
1استادیار وسسه تحقیقات جنگلها و مراتع کشور گروه تحقیقات حفاظت و حمایت جنگل ها و مراتع
2موسسه تحقیقات جنگل‌ها و مراتع کشور، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، تهران، ایران
3کارشناس تحقیقات
4موسسه تحقیقات جنگلها و مراتع کشور
چکیده
بلوط به عنوان یکی از مهم‌ترین گونه‌های درختی جنگل‌های ایران که حدود 55% مساحت کل جنگل‌های کشور را شامل می‌شود، در معرض خسارت شدید آفت شب‌پره برگخوار سفید بلوط (Leucoma wiltshirei Coll. 1938) قرار گرفته است. این شب‌پره به دلیل دارا بودن نسل‌های متعدد، قدرت پتانسیل بالا در تخم‌گذاری، مقاومت در برابر شرایط سخت میکروکلیمایی و رژیم غذایی تک‌‌خواری (برگ بلوط) یکی از مهم‌ترین آفات درختان بلوط است. به منظور یافتن عوامل کنترل بیولوژیک طبیعی و استفاده از آن‌ها علیه آفت مزبور، از جنگل‌های بلوط استان فارس بازدید و نمونه‌برداری به عمل آمد. لاروهای تغییر شکل و یا تغییر رنگ داده جمع‌آوری شده‌، پس از ضدعفونی سطحی با هیپوکلریت سدیم 5% به مدت یک دقیقه، اتانول 96% یک دقیقه و سه بار شستشو با آب مقطر استریل، بر روی کاغذ صافی خشک شده و سپس در محیط کشت PDA و دمای 25 درجه سلسیوس، انکوبه شدند. پس از گذشت 5 روز از کلنی قارچی حاصل، کشت خالص تهیه شد. ویژگی‌های کلنی (رنگ، سرعت رشد)، میکرو و ماکروکنیدی، شکل و اندازه کنیدیوفور با استفاده از میکروسکوپ نوری بررسی شد. استخراج DNA از میسلیوم کشت 7 روزه قارچ خالص با روش CTAB و با استفاده از آغازگرهای ITS1F و ITS4 انجام شد. کلنی قارچ دارای میسلیوم‌های هوایی، رنگدانه قرمز تا نارنجی رنگ در مرکز کشت و پس از 5 روز قطر کلنی کشت شده به 90 میلی‌متر رسید. ماکروکنیدی 4-5 سلولی، میکروکنیدی مشاهده نشد. نتایج آنالیز بلاست توالی نشان داد با جدایه‌های Fusarium acuminatum Ellis & Everh. (1895) بانک ژن، 99% شباهت دارد و با کد دسترسی PP894313 در پایگاه داده NCBI ثبت شده است. گونه‌های مختلفی از جنس فوزاریوم در کنترل حشرات بسیار کارآمد بوده و ویژگی‌های امیدبخشی در کنترل آفات کشاورزی و منابع طبیعی از جمله ایجاد تلفات بالا در لارو و حشره کامل، عملکرد سریع و اسپورزایی بالا از خود نشان می‌دهند. حداقل 30 گونه و 273 جدایه فوزاریوم تاکنون به عنوان بیمارگر حشرات گزارش شده‌اند. گزارشاتی از جداسازی و بیماریزایی F. acuminatum از روی برخی حشرات مانند مگس ساقه گندم و سوسک چوبخوار طوقه و ریشه وجود دارد. این گزارش اولین مورد از جداسازی این قارچ از شب‌پره برگخوار سفید بلوط می‌باشد.
کلیدواژه ها
 
Title
Report of Fusarium acuminatum Ellis & Everh. from oak moth larvae, Leucoma wiltshirei Coll. (Lepidoptera: Erebidae)
Authors
Seyedeh Masoomeh Zamani, Marzieh Alinezhad, Narges sepasi, Reyhaneh Gholami, Samira Farahani
Abstract
The Oak, one of the most important tree species in Iran's forests, which accounts for about 55% of the country's forests, has been subjected to severe damage by the oak moth (Leucoma wiltshirei Coll. 1938). This moth is one of the most important pests of oak trees because it has multiple generations, has high laying potential, is resistant to harsh microclimatic conditions and has a scavenging (oak leaves) diet. In order to find natural biological control agents and use them against the mentioned pest, the oak forests of Fars province were visited and sampled. The deformed or discolored larvae were collected, after surface disinfection with 5% sodium hypochlorite for 1 minute, 96% ethanol for 1 minute and washing three times with sterile distilled water, they were dried on filter paper and then incubated in PDA culture medium and temperature of 25 degrees. After 5 days, a pure culture was prepared from the resulting fungal colony. Colony characteristics (color, growth rate), micro and macro conidia properties, shape and size of the conidia carriers were examined under the light microscope. DNA extraction from the mycelium of a 7-day fungus culture was carried out using the CTAB method and using the ITS1F and ITS4 primers. The fungal colony has aerial mycelium, red to orange pigment in the center and reaches a size of 90 mm after 5 days at 25 degrees. Macroconidia 4-5 cells, microconidia were not observed. The results of sequence blast analysis showed that it has 99% similarity to Fusarium acuminatum Ellis & Everh. (1895) isolates from the GenBank and is registered in the NCBI database with accession code PP894313. Many Fusarium lineages have been reported to be efficient in controlling insects and to exhibit promising characteristics for agricultural and natural resources pest control such as causing high mortality rates in larvae and adult, having fast action and abundant sporulation. At least 30 species and 273 isolates of Fusarium were reported as pathogenic to at least one species of insect. There are reports of the isolation and pathogenicity of F. acuminatum in some insects such as the wheat stem fly and the wood-eating beetle. This report is the first case of isolation of this fungus from the white oak moth.
Keywords
Biocontrol, entomopathogenic fungi, Forest, Fusarium, Wiltshire’s white oak moth