شناسایی قارچ‌های اندوفیت نخود ایرانی کشت شده در شرایط دیم و آبی

پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 1635-25IPPC
نویسندگان
1ندارم
2عضو هیئت علمی - استاد
3عضو هیئت علمی
4استاد
چکیده
به دنبال شکسته شدن رکورد بی‌سابقه افزایش دما در سال‌های اخیر و کاهش بازده محصولات مهم کشاورزی از جمله نخود، به عنوان ارزان‌ترین و غنی‌ترین منبع تامین انرژی و پروتئین برای جمعیت رو به رشد انسان، اهمیت ریزاندامگان همزیست گیاهی از جمله اندوفیت‌‌ها به دلیل قابلیت خود در افزایش مقاومت گیاهان در برابر تنش‌های غیرزنده به عنوان یکی از راه حل‌های کلیدی در برطرف نمودن این چالش مورد توجه واقع شده‌اند. در این راستا، به منظور بررسی و شناسایی قارچ‌های اندوفیت موجود در اندام‌های هوایی و زیرزمینی نخود ایرانی کشت‌شده در شرایط دیم و آبی، نمونه برداری از گیاهان سالم در مزارع مناطق مختلف استان کرمانشاه صورت گرفت. به منظور جداسازی قارچ‌ها اندوفیت، پس از قرارگیری نمونه‌ها در زیر جریان ملایم آب؛ اندام‌های برگ، ریشه و غلاف به ترتیب با قرار گیری به مدت یک دقیقه در هیپوکلریت سدیم رقیق‌شده یک درصد، سه بار شست وشو در آب مقطر سترون ، قرار گیری به مدت ده ثانیه در اتانول 70 درصد و سه بار شست و شو در آب مقطر سترون؛ اندام ساقه با قرارگیری به مدت دو دقیقه در هیپوکلریت سدیم رقیق شده چهار درصد، سه بار شست و شو در آب مقطر سترون، و بذور نخود نیز با قرار گیری بهمدت سه دقیقه در اتانول 95 درصد، بهمدت یک دقیقه در آبمقطر استریل، بهمدت دو دقیقه در هیپوکلریت سدیم رقیق شده 5/3 درصد + توئین 20 (یک قطره به ازای هر ده میلی‌لیتر هیپوکلریت سدیم) و سه بار شست و شو در آب مقطر سترون، ضدعفونی گردیدند. پس از رطوبتزدایی سطحی نمونه‌ها لابلای دستمال کاغذی سترون، نمونه‌ها درون تشتک‌های پتری محتوی PDA داری 30 میلی‌گرم در لیتر آنتیبیوتیک (کلرامفنیکول و جنتامایسین) کشت شدند. تشتک‌ها در انکوباتور با دمای 25 درجه سلسیوس و تحت شرایط تاریکی نگهداری شدند و در طی یک ماه با بررسی نمونه‌ها، هیف‌های قارچی رشد یافته از حاشیه پرگنه جداسازی و به روش تک‌ریسه سازی روی محیط کشت آب-آگار خالص سازی شدند. در نهایت 160 جدایه به‌دست آمد که پس از شناسایی ریخت شناختی و مولکولی مبتنی بر نواحی ژنومی (CAL ،TEF، β-tubulin ، ITS و (LSU مشخص شد که متعلق به گونه‌های قارچی Fusarium acuminatum (21 جدایه)، F. redolense(55 جدایه)، Chaetomium rectangulare (7جدایه)، Aspergillus luchuensis (8 جدایه)، Cladosporium sp. (12 جدایه)، Aspergillus sp. (34 جدایه)، می‌باشند. در میان ارقام، نخود دیم با سهم 79 درصد دارای بیشترین فراوانی و تنوع قارچ در مقایسه با ارقام نخود آبی با سهم 21 درصد بودند. براساس بررسی منابع در دسترس، تحقیق پیش رو اولین مطالعه به منظور شناسایی قارچ‌های اندوفیت نخود ایرانی در ایران می‌باشد.
کلیدواژه ها
 
Title
Identification of endophytic fungi of Iranian chickpea cultivated under the condition of rain-fed and wet
Authors
Mohammad Hojati, Mohammad Javan-Nikkhah, Khalil-Berdi Fotouhifar, Mohammad Reza Bihamta
Abstract
Following the breaking of unprecedented record of temperature rise in the recent years and yield reduction of important agricultural products, including chickpea as the cheapest and richest source of energy and protein for the growing human population, the importance of plant symbiotic microorganisms, including endophytes, due to their ability to increase the resistance of plants against abiotic stresses, they have been considered as one of the key solutions to solve this challenge. In this regard, to identification of endophytic fungi present in the aerial and underground organs of Iranian chickpea under wet and rain-fed conditions, healthy crops were sampled in the fields located at different regions of Kermanshah province, Iran. To isolate endophyte fungi, after washing the samples under running tap water, the leaves, roots and pods were surface sterilized by the immersion sequence in 1% sodium hypochlorite for 1 minute, rinsed three times in sterile distilled water, immersion in 70% ethanol for 10 seconds and rinsed three times in sterile distilled water and the stems were disinfected by immersion in 4% sodium hypochlorite for 2 minutes and rinsed three times in sterile distilled water and seeds also disinfected by immersion sequence in 95% ethanol for 3 minutes, rinsed in sterile distilled water for 1minute, sodium hypochlorite 3.5% + tween 20 (1drop/per10cc sodium hypochlorite) for 2 minutes and rinsed three times in sterile distilled water. After the surface dehydrate of disinfected organs among sterile paper towels, each of the organs placed, on PDA containing 30 mg/liter of antibiotic (chloramphenicol and gentamicin) and the plates were incubated in darkness at 25 oC, and during one month of the samples examination, the fungal isolates grown from the edge of colony were purified from water-agar medium by hyphal tipping method. All 160 isolates obtained, were subjected to identification based on morphological and molecular characterization. Molecular characterization was done based on the sequencing of different genomic regions (CAL, TEF, β-tubulin, ITS, LSU). Among the isolates, Fusarium acuminatum (21 isolates), F. redolense (55 isolates), Chaetomium rectangulare (7 isolates), Aspergillus luchuensis (8 isolates), Cladosporium sp. (12 isolates), Aspergillus sp. (34 isolates) were identified. this investigation reveals that rain-fed chickpea contains the more variety of fungi (79%) compared to the wet chickpea (21%). Based on knowledge, the present research is the first study to identify endophyte fungi of chickpea in Iran.
Keywords
Kermanshah, morphology, Sample, sequencing