اولین گزارش بیماری لکه باکتریایی آفتابگردان (Pseudomonas syringae pv. helianthi) از استان آذربایجان‌غربی

پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 1773-25IPPC (R1)
نویسندگان
1عضو هیئت علمی دانشگاه آزاد مهاباد
2کلینیک گیاه پزشکی شرکت زیست آسای گیتی
3دانشگاه آزاد اسلامی تبریز
چکیده
به منظور جداسازی عامل بیماری لکه باکتریایی آفتابگردان، درسال 1403-1402 از مزارع تحت کشت در استان آذربایجان غربی از شهرستان‌های ارومیه و نقده نمونه‌برداری شد. پس از جداسازی و کشت نمونه‌های آلوده روی محیط آگار غذایی حاوی سوکروز یک باکتری کرم رنگ، گرم منفی، اکسیداز منفی و لوان مثبت جداسازی شد. جدایه‌ها در روی محیط King’s B تولید رنگدانه سبز فلورسنت کردند، همچنین در آزمون‌های لهانیدن ورقه‌های سیب‌زمینی و آرژنین دهیدرولاز منفی بودند و روی توتون فوق حساسیت ایجاد کردند که نشان دهنده تعلق آنها به گروه Ia سودوموناس‌ها است. برای شناسایی باکتری‌ها به روش فنوتیپی، آزمون‌های بیوشیمیایی، فیزیولوژیکی و تغذیه‌ای طبق روش‌های استاندارد باکتری شناسی انجام گردید. برای انجام آزمون بیماریزایی و تعیین دامنه میزبانی، جدایه‌ها به میزبان‌های هلو، شلیل، گوجه‌فرنگی، گندم و آفتابگردان تزریق شدند که پس از سه الی چهار هفته نگهداری در شرایط گلخانه، جدایه‌های مورد نظر فقط روی آفتابگردان بیماریزا بودند، بدین صورت که علائم بیماری در ابتدا بصورت نقاط کلروتیک شبه ویروسی آغاز می‌شوند و سپس تبدیل به لکه‌های نکروزه وسیع در حاشیه برگ شده و به سمت داخل پهنک پیشروی می‌کنند. به منظور شناسایی ژنوتیپی، دی ان ای جدایه‌های منتخب، استخراج و پس از تکثیر ژن‌های و 16S rRNA و ژن، rpoD ، محصول PCR به منظور توالی‌یابی به شرکت سیناژن فرستاده شدند. توالی‌های بدست آمده با سایر توالی‌های موجود در بانک ژن مورد مقایسه قرار گرفتند و بر این اساس درخت فیلوژنتیکی رسم گردید. نتایج نشان دادند که جدایه‌های بدست آمده از آفتابگردان بیش از 99 درصد به سویه‌های مرجع Pseudomonas syringae pv. helianthi شباهت داشتند و در درخت فیلوژنتیکی رسم شده در گروهی مجزا از سایر گونه‌های سودوموناس قرار گرفتند. بر اساس آزمون‌های فنوتیپی، بیماریزایی و ژنوتیپی جدایه‌های عامل بیماری لکه باکتریایی آفتابگردان در استان آذربایجان غربی به عنوان P. syringae pv. helianthi شناسایی شدند. این اولین گزارش از جداسازی و شناسایی این پاتوار در شمال غرب ایران به عنوان عامل بیماری لکه باکتریایی آفتابگردان می‌باشد.
کلیدواژه ها
 
Title
First report of sunflower bacterial spot disease (Pseudomonas syringae pv. helianthi) from west Azarbaijan province, Iran
Authors
Nabi Khezrinejad, Arezou Aalami Delahzi, Kiomars Rouhrazi
Abstract
In order to isolate the causal agent of sunflower bacterial spot disease, in 2023-2024, samples were taken from this crop fields in West Azerbaijan province from Urmia and Naqadeh. After isolating and culturing the infected samples on nutrient agar medium containing sucrose, a cream-colored, gram and oxidase-negative and Levan-positive bacteria was isolated which produced fluorescent green pigment on the King's B medium, meanwhile demonstrated negative results in the pectinase and arginine dihydrolase tests on the other hand it displayed positive results for tobacco hypersensitivity reaction, which indicates that they belongs to group Ia of Pseudomonas. To identify bacteria by phenotypic methods, biochemical, physiological and nutritional tests were performed in the manner of standard bacteriological methods. To carry out the pathogenicity test and ascertain the host range, the isolates were injected into peach, nectarine, tomato, wheat and sunflower hosts, and after three to four weeks in greenhouse conditions, the intended isolates were pathogenic only on sunflower the symptoms of the disease initially appears as chlorotic spots as virus like symptoms which progress into extensive necrotic lesions at leaf edges, progressing toward the center of the leaf. For genotypic identification, the DNA of the selected isolates were extracted and after amplification of 16s rRNA and rpoD genes, they were sent to Cinagen company for sequencing. The obtained sequences were compared with other sequences in the gene bank, and based on that, a phylogenetic tree was drawn. The consequences demonstrated which isolates from sunflower had more than 99% similarity to the standard strains of Pseudomonas syringae pv. helianthi and also were placed in another group separately with other Pseudomonas species in the drawn phylogenetic tree. According to all the phenotypic, pathogenicity and genotypic tests, the isolates were identified as P. syringae pv. helianthi, the causal agent of sunflower bacterial spot disease in West Azarbaijan province. This is the first report of the isolation and identification of this pathovar in Northwest of Iran as the causal agent of sunflower bacterial spot disease.
Keywords
Phatogenicity, Phenotypic, Genotypic, 16S rRNA, rpoD