تأثیر دما بر رشد رویشی و بیماریزایی عامل بلایت شمشاد، Calonectria pseudonaviculata تحت شرایط آزمایشگاه و گلخانه
پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 1791-25IPPC
نویسندگان
1گروه گیاهپزشکی، دانشکده علوم کشاورزی، دانشگاه گیلان، رشت
2دانشگاه گیلان
چکیده
شمشاد جنگلی با نام علمی Buxus hyrcana Pojark از مهمترین گونههای گیاهی همیشهسبز اختصاصی جنگلهای حاشیه دریای خزر است. به منظور بررسی اثر درجه حرارتهای مختلف بر رشد رویشی عامل بلایت شمشاد، قطعهای به قطر 5 میلیمتر از هر جدایه در مرکز تشتکهای پتری به قطر 9 سانتیمتر حاوی محیط کشت PDA قرار داده شد و کشتها در دمای 35-5 درجه سلسیوس به فاصله 5 درجه در سه تکرار در انکوباتور قرار گرفتند. سپس میزان رشد شعاعی جدایهها هر 48 ساعت یکبار اندازهگیری شد. همچنین بررسی اثر دما روی بیماریزایی، با استفاده از آزمون برگ بریده به صورت مایهزنی اینوکلوم روی برگها با روش گوو و همکاران انجام گرفت. بدین صورت که پنج برگ با سه تکرار در ظروف پتری 100×10 میلیمتر حاوی آب-آگار 5/1 % از قسمت دم برگ به صورت ایستاده قرار گرفتند و سپس 5 میکرولیتر از مایه تلقیح با غلظت 10X با استفاده از سمپلر روی سطح برگها مایهزنی شد. اطراف تشتکهای پتری با پارافیلم مسدود شد و تشتک ها در دماهای 35-5 درجه سلسیوس به فاصله 5 درجه در انکوباتور قرار گرفتند. این آزمایش با سه تکرار و با یک کنترل منفی به عنوان تیمار شاهد انجام شد. برگها هر 48 ساعت یکبار به منظور پیگیری روند پیشرفت علایم بیماری بررسی شدند. جهت ارزیابی شدت بیماری در گلخانه، پس از کشت قارچ عامل بیماری روی محیط کشت PCA و نگهداری به مدت دو هفته، اسپورهای تولید شده با آب مقطر استریل شستشو شدند و سوسپانسیون اسپوری با غلظت 104×4 تهیه شد. مایهزنی با روش فرو بردن برگ گیاه در سوسپانسیون اسپور انجام شد. برای تأمین رطوبت بهینه جوانه زنی اسپور و ایجاد بیماری (80-90%)، هر یک از گلدانها با کیسه نایلونی پوشانده شد و یک قطعه پنبه خیس جهت حفظ رطوبت در نایلون قرار داده شد. گلدان ها در دماهای 15-20، 20-25 و 25-30 درجه سلسیوس در گلخانه قرار گرفتند. ارزیابی میزان بیماریزایی 4 بار با فاصلهی هر 5 روز یکبار انجام شد. بر اساس نتایج، بالاترین میزان رشد رویشی استرینها در دمای 25 درجه سلسیوس و کمترین رشد رویشی در دمای 5 درجه سلسیوس اتفاق افتاد و همچنین میزان رشد رویشی پرگنه در دمای 30 و 35 درجه سلسیوس صفر بوده است. همچنین بالاترین و پایینترین میزان بیماری تحت شرایط آزمایشگاه به ترتیب در دماهای 20 و 5 درجه سلسیوس بوده و میزان بیماری در دما 30 درجه سلسیوس و بالاتر صفر بوده است. در ارزیابی تأثیر دما بر بیماریزایی قارچ مذکور تحت شرایط گلخانه بر اساس ارزیابی شدت بیماری، نتایج نشان داد که در دماهای 25-20 و 20-15 به ترتیب دارای بالاترین و پایینترین میزان بیماری بوده اند.
کلیدواژه ها
Title
Effect of temperature on vegetative growth and pathogenicity of the boxwood blight agent, Calonectria pseudonaviculata, under laboratory and greenhouse conditions
Authors
Akram Mousavi, Sedigheh Mousanejad, Ahmad Rouhibakhsh, سید اکبر خداپرست
Abstract
Forest boxwood, with the scientific name Buxus hyrcana Pojark, is one of the most important evergreen plant species specific to the forests of the Caspian Sea. To investigate the effect of different temperatures on the vegetative growth of the boxwood blight agent, a piece with a diameter of 5 mm from each isolate was placed in the center of Petri dishes with a diameter of 9 cm containing PDA culture medium. The cultures were kept at temperatures ranging from 5 to 35 degrees Celsius, with a 5-degree interval. They were placed in the incubator in three replicates. Then, the radial growth rate of the isolates was measured once every 48 hours. Additionally, the effect of temperature on pathogenicity was investigated using the cut leaf test, following Guo et al.'s method. Five leaves were placed in 10*100 mm Petri dishes containing water-agar 1.5%, upright from the tail of the leaf. Subsequently, 5 microliters of inoculum with a 10X concentration were inoculated onto the surface of the leaves. The Petri dishes were covered with parafilm and placed in an incubator at temperatures ranging from 5 to 35 degrees Celsius, with a 5-degree interval. This experiment was replicated three times, including a negative control. The leaves were checked every 48 hours to monitor the progression of disease symptoms. To assess the severity of the disease in the greenhouse, the causative fungus was cultivated on PCA culture medium and incubated for two weeks. The spores produced were rinsed with sterile distilled water, and a spore suspension with a concentration of 4*104 was prepared. Inoculation was carried out by immersing the plant leaf in the spore suspension. To provide optimal humidity for spore germination and disease development (80-90%), pots were covered with nylon bags, and a piece of wet cotton was placed inside the nylon to maintain moisture. The pots were placed in the greenhouse at temperatures of 15-20, 20-25, and 25-30 degrees Celsius. The assessment of pathogenicity was conducted four times, with a five-day interval. Based on the results, the highest rate of vegetative growth of strains occurred at 25 degrees Celsius, and the lowest rate occurred at 5 degrees Celsius. Additionally, the rate of vegetative growth of strains at 30 and 35 degrees Celsius was zero. Moreover, the highest and lowest rates of disease under laboratory conditions were at temperatures of 20 and 5 degrees Celsius, respectively. Furthermore, the rate of disease at temperatures of 30 degrees Celsius and above was zero. In evaluating the effect of temperature on the pathogenicity of the fungus under greenhouse conditions, based on the assessment of disease severity, the results showed that temperatures of 20-25 and 15-20 had the highest and lowest disease rates, respectively.
Keywords
boxwood, temperature, vegetative growth, Pathogenicity, cut leaf test