اولین گزارش ویروس پنهان زعفران (SaLV) از مزارع زعفران استان گلستان با آنتی سرم چند‌همسانه‌ای اختصاصی ویروس

پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 1981-25IPPC
نویسندگان
1دانشجوی کارشناسی ارشد بیماری شناسی گیاهی دانشگاه تهران
2چهارراه دانشکده پردیس کشاورزی و منابع طبیعی- گروه گیاهپزشکی
3بخش تحقیقات گیاهپزشکی، مرکز تحقیقات و آموزش کشاورزی و منابع طبیعی استان گلستان، گرگان، ایران
چکیده
ایران با تولید بیش از 90 درصد زعفران دنیا، به عنوان مهمترین کشور تولید کننده طلای سرخ در دنیا شناخته می شود. ویروس پنهان زعفران (saffron latent virus, SaLV) Potyvirus croci شایع‌ترین ویروس آلوده کننده گیاهان زعفران در ایران شناخته شده است. آلودگی گیاه زعفران به این ویروس، باعث کاهش کیفی محصول زعفران می‌شود. درحال حاضر، زعفران در اغلب استان‌های کشور، از جمله استان‌های شمال ایران کشت می‌شود. بیش از 500 هکتار از 680 هکتار سطح زیر‌کشت زعفران استان گلستان در سال 1402 به شهرستان آزادشهر (به خصوص مناطق وامنان و سیب‌چال) اختصاص داشت. پس از بیان ژن پروتئین پوششی ویروس در سیستم باکتریایی و تخلیص آن به روش کروماتوگرافی، پروتئین پوششی نوترکیب ویروس پنج بار به‌صورت زیر جلدی و در فواصل زمانی دو هفته‌ای به یک خرگوش سفید نیوزیلندی تزریق شد. دو هفته بعد از آخرین تزریق، خونگیری انجام و ‌سرم خون به روش سانتریفیوژ جدا و از فیلتر 2/0 میکرون صاف شد. طی بازدید از مزارع زعفران مناطق وامنان و سیب‌چال، تعداد 25 نمونه برگ گیاهان زعفران با علائم کم‌رشدی، زردی و موزائیک خفیف جمع‌آوری و آلودگی آنها به SaLV به روش الایزای غیرمستقیم، با استفاده از رقت 8000 برابر آنتی‌سرم چندهمسانه‌ای اختصاصی ویروس و رقت 30000 برابر آنتی‌بادی متصل به آنزیم ضدخرگوش مورد بررسی قرار گرفت. میزان جذب نور در طول موج 405 نانومتر 15 نمونه 2/1 تا 6/2 ثبت شد، در حالی‌که جذب نور شاهد (گیاه سالم) در این طول موج 26/0 بود. براساس این نتایج، 60 درصد نمونه های مورد بررسی زعفران آلوده به ویروس پنهان زعفران بود. این اولین گزارش آلودگی گیاه زعفران به SaLV در استان‌های شمال کشور می‌باشد. با استخراج IgG و تهیه کانجوگیت اختصاصی SaLV و توسعه سیستم ردیابی اختصاصی SaLV به روش ساندویچ دوطرفه الایزا، امکان ردیابی ویروس در دسترس عموم خواهد بود.
کلیدواژه ها
 
Title
The first report of Potyvirus croci (saffron latent virus (SaLV)) in the saffron fields of Golestan province by specific polyclonal antiserum
Authors
Saeed Sedaghatian, Akbar Dizadji, Parisa Sharifi Nezam Abad
Abstract
Iran, providing nearly 90% of the world's total production of saffron, is the most significant red gold producer in the world. Potyvirus croci (saffron latent virus, SaLV) is the most prevalent virus in the saffron fields of Iran. SaLV infection causes quality reduction of the saffron crop. Nowaday, saffron is extensively cultivated in the most provinces of Iran, such as Northern provinces. More than 500 out of 680 ha of saffron cultivation areas in Golestan province (Northern province of Iran) is centered in Azadshahr (Vamenan and Sibchal regions), in 2023. Following SaLV coat protein (CP) gene expression in bacterial system and purification through chromatography, recombinant SaLV-CP was injected subcutaneously five times at two-week intervals to a New Zealand White rabbit. Blood was drawn two weeks after the last injection and the serum was separated by centrifugation and filtered through a 0.2 micron filter. During a survey carried out in saffron grown fields in Vamenan and Sibchal regions, a total of 25 saffron leaf tissue samples, showing reduced growth, yellowing and mild mosaic symptoms, were collected. The presence of SaLV was checked in collected samples by indirect-ELISA, using polyclonal SaLV specific raw antiserum and goat anti-rabbit secondary antibody (dilutions of 8000 and 30000, respectively). The absorbance values of 15 saffron samples at 405 nm was recorded as 1.2- 2.6, while the value of control (healthy plant) was as 0.26. Based on the results, 60% of collected saffron samples were SaLV- infected. This is the first report of SaLV infection in the saffron fields of Northern provinces of Iran. By extraction of SaLV-specific IgG, conjugate preparation and development of SaLV-specific detection through DAS-ELISA, the virus detection will be available to the public.
Keywords
Indirect-ELISA, Management, Serological detection, Specific detection