تشدید بیان ژن شبه تایونین (ThiL)در گیاه ارابیدوپسیس و ایجاد مقاومت به دو گونه مهم قارچ فوزاریوم
پذیرفته شده برای پوستر
کد مقاله : 2069-25IPPC (R2)
نویسندگان
عضو هیات علمی دانشگاه زابل
چکیده
پپتیدهای ضد میکروبی گیاهی از گونه های مختلف گیاهان جداسازی شده اند و نقش مهمی در ایجاد مقاومت به عوامل بیماریزای گیاهی ایفا می کنند. این پپتیدها از اندامهای مختلف گیاهی جداسازی و غنی از سیستیین هستند. هدف از این پژوهش بررسی اثر تشدید بیان ژن شبه تایونین در گیاه ارابیدوپسیس در ایجاد مقاومت به دو گونه بیمارگر مهم از جنس Fusarium می باشد. ژن شبه تایونین از گیاه ارابیدوپسیس جداسازی گردید و این ژن با کمک باکتری اگروباکتریوم و ناقل پلاسمیدی pMAAred در گیاهان تراریخت کلون سازی گردید. بیان ژن در لاینهای تشدید بیان شده بوسیلهRT-PCR و مشاهده بذرهای قرمز تایید گردید. بذرهای خالص این لاینها کشت گردیدند و لاینهای دارای بیان بیشتر این ژن با کمک qRT-PCR تعیین گردیدند. برای بررسی مقاومت لاینهای تشدید بیان شده، این لاینها با قارچهای بیماریزای F. graminearum و F. oxysporum f .sp. matthiola با دو روش محیط کشت مایع و اسپری مایه تلقیح روی گیاهچه ها در اتاقک رشد صورت گرفت. سطح گیاهچه ها با محلول لاکتوفنل تریپان آبی تیمار و شاخص بیماری تعیین گردید. برای هر تیمار شش گیاه و آزمایش سه بار تکرار و سطح آلودگی چهار روز پس از آلودگی بررسی گردید. نتایج نشان داد که لاین های تشدید بیان شده دارای مقاومت افزایش یافته معنی داری در مقایسه با رقم نوع وحشی ارابیدوپسیس نسبت به قارچ های بیمارگر در این پژوهش می باشند.
کلیدواژه ها
Title
Overexpression of thionin like gene in Arabidopsis and resistance to two species of Fusarium
Authors
Shir Ahmad Sarani
Abstract
Antimicrobial plant peptides such as thionin like, are small cysteine-reach that have been isolated from several plant species and play an important role in resistance to plant pathogens. The purpose of this study is overexpression of ThiL gene for resistance to two species of Fusarium. The thionin-like gene has isolated from Arabidopsis thaliana and transgenic plants were generated through Agrobacterium-mediated using the pMAA-red vector by the floral dips method. Expression of the thionin-like gene in overexpression lines were confirmed by RT-PCR and observation the red seeds. Homozygous seeds of overexpression lines were planted and high overexpression of peptide in plant indicated by quantitative RT-PCR. To evaluate the possible involvement of the resistance to, the overexpression plants were tested for their responses to the pathogens F. graminearum and F. oxysporum f .sp. matthiola using the two traits; first, liquid media method. Second, spray inoculation of whole seedlings. Seedling phenotypes were visualized by lactophenol-trypan blue staining and disease index (DI) was measured. For each line, 6 plants were used and the experiment was repeated three times. The level of infection was evaluated 4 dpi and overexpression lines showed enhanced resistance against Fusarium. The results showed the significant difference between the disease index in overexpression lines and the wild-type (col) plants. This result showed that overexpressed genes increase the plant resistance against the examined fungi.
Keywords
Plant antimicrobial peptides, Pathogenic fungi